Validering av metoden «NS-EN 12822:2014» for bestemmelse av vitamin E med væskekromatografi (HPLC). Måling α-, β-, γ- og δ-tokoferol (BIOLAB A121 Tokoferolprofil)

Abstract

Formålet med dette prosjektet er å validere metoden «NS-EN 12822:2014» for bestemmelse av vitamin E innhold (α-, β-, γ- og δ-tokoferoler) i fôr og fôringredienser. Tørre prøver forsåpes med kaliumhydroksid oppløst i etanol. Vitamin E ekstraheres over til heksan-etylacetat fasen som ovenføres til målekolben og fortynnes om nødvendig til ønsket konsentrasjon. Innholdet av vitamin E bestemmes ved væskekromatografi (HPLC, Agilent 1200) med fluorescensdeteksjon. Mengden av α-, β-, γ- og δ-tokoferol rapporteres. Analysemetoden heter BIOLAB A121 Tokoferolprofil i intern kvalitetssystemet. Fiskefôr og fôringredienser (fiskemel og oljer) ble valgt som prøvemateriale siden de er de mest etterspurte prøvetyper i forbindelse med vitamin E analyser hos Nofima Biolab. Den eksterne valideringen omfatter ikke disse prøvetyper. På grunn av at forsåpningsfunksjon i metoden er matriksavhengig, undersøkes forsåpning av fiskefôr og fôringredienser i valideringen. Det ble utført en validering av riktighet, presisjon, linearitet, måleområde og måleusikkerhet. Etter systematisk gjennomgang av resultater og ut ifra det statistiske grunnlaget anses metodens riktighet og presisjon til å være godkjent.

The purpose of this project was to validate the method "NS-EN 12822: 2014" for the determination of vitamin E content (α-, β-, γ- and δ-tocopherols) in feed and feed ingredients. Dry samples are saponified with potassium hydroxide dissolved in ethanol. Vitamin E is extracted into the hexane-ethyl acetate phase which is transferred to the volumetric flask and diluted to the desired concentration. Vitamin E content is determined by high-performance liquid chromatography (HPLC, Agilent 1200) with fluorescence detection. The amount of α-, β-, γ- and δ-tocopherol is reported. The analysis method is called as BIOLAB A121 Tokoferolprofil in the internal quality system. It was performed a validation of accuracy, precision, linearity, measurement range and measurement uncertaint. Fish feed and feed ingredients (fish meal and oils) were selected as test material, because they are the most requested sample material for vitamin E analyze at Nofima Biolab. After a systematic review of results, the method is considered to be approved.